Culture in vitro
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La préparation des milieux de culture est la première étape à réaliser lorsque l'on fait de la culture in vitro.

Vous pouvez vous procurer dans le commerce des milieux de culture en poudre prêts à l'emploi. Il suffit de lire les indications notées sur le sachet pour y arriver.

Attention toutefois à bien lire la notice fournie, car certaines formules ne contiennent pas de sucre, de charbon actif, d'agar-agar...

C'est une bonne solution pour débuter car cela évite l'achat du petit matériel et des produits chimiques nécessaires à la fabrication de ses milieux de culture.

Il se peut qu'au bout de quelques mois, le prix de revient, le manque de flexibilité dans la formulation des milieux proposés dans le commerce et le plaisir de faire de la chimie chez soi,  vous feront opter comme moi, pour une fabrication maison.

I- Préparation d'une solution mère

Dans le cas où vous avez décidé de préparer vous-même vos milieux de culture, réservez vous une demi-journée pour la préparation d'une solution concentrée de milieux de culture, appelée solution mère qui vous permettra de préparer au moment venu plusieurs litres très rapidement.

Le principe est de partir de la formulation de base des milieux de culture et de multiplier toutes les quantités par 10 ou par 100 (le seul facteur limitant est la solubilité des produits utilisés). Stockées au réfrigérateur (4°C) vous pourrez les conserver pendant plusieurs mois.

  1. La pesée

Les produits chimiques de base sont vendus sous forme de poudre soluble dans l'eau dans la majorité des cas, plus rarement dans l'éthanol ou la soude.

La première opération va donc consister à peser ces différents produits. En fonction des valeurs à peser, nous utiliserons soit une balance précise au gramme, soit une balance précise au 100ème de gramme (10 mg). Pour les valeurs inférieures, nous serons obligés d'utiliser la méthode de dilution.

  1. La mise en solution

Les différents produits en poudre vont être ajoutés dans une fiole jaugée de 1 litre et agités, soit à l'aide d'un mélangeur à barreau magnétique (comme ici), soit en remuant la fiole.

La préparation des solutions mère doit prendre en compte la solubilité des produits utilisés, au risque de voir un dépôt se former au fond de la fiole. C'est notamment le cas du CaHPO4 (Phosphate dibasique de calcium) qui a une solubilité dans l'eau de 0,2g.l-1 et qui entre dans la composition du milieu de Malmgren utilisé pour les orchidées rustiques. Ce milieu devra être préparé à la demande.

C'est donc les différentes valeurs de solubilité des produits utilisés qui va nous indiquer le facteur de multiplication des solutions mères.

Tous les produits étant ajoutés, on ajuste le volume à l'aide d'eau osmosée jusqu'au trait de jauge.

On transvase ensuite la solution dans une bouteille ambrée (ou recouverte de papier aluminium) que l'on conserve au réfrigérateur (4°C).

Stockées ainsi, ces solutions peuvent se conserver des mois, la seule précaution à prendre avant chaque utilisation étant de vérifier si l'un des produits n'a pas précipité au fond de la bouteille. Si c'est le cas, il faut jeter le milieu de culture (cela arrive quelquefois avec les solutions de fer chélaté trop anciennes).

Remarque: Si vous vous servez très souvent du même milieu de culture (MS/3 pour ma part), il peut être très intéressant de préparer des aliquotes. A partir de la solution mère, vous prélevez la quantité nécessaire à préparer 1 litre de milieu de culture que vous stockez dans un récipient placé au congélateur. Cette technique à l'avantage d'éviter toute précipitation de composés qui se produit même au frigo. Le jour  de la fabrication du milieu de culture, vous n'avez qu'à sortir votre aliquote du congélateur et ajouter les autres composés chimiques (sucre, peptone, hormones).

Préparation des solutions mère

II- Préparation d'une solution fille à partir d'une solution mère

  1. Les milieux de culture

Comme nous l'avons vu, il existe trois milieux de culture de base qui vont vous permettre de cultiver aussi bien des orchidées terrestres et exotiques que des plantes carnivores :

Préparation d'une solution fille à partir d'une solution mère

  1. Le Fer chélaté
  2. Les solutions d'hormones

Date de création : 21/09/2016 08:56
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